一、天门冬氨酸氨基转移酶
天门冬氨酸氨基转移酶(AST),又称谷草转氨酶(GOT),广泛分布于人体各组织中,红细胞含的AST约为血清10倍,轻度溶血会使测定结果升高。AST有两种同功酶ASTs和ASTm,分别存在于可溶性的细胞质和线粒体。正常血清所含AST的同功酶主要为ASTs,但在病理状态下,如细胞坏死,则血清中以ASTm为主。AST主要用于心肌梗死的酶学诊断指标。但由于AST在AMI时升高迟于CK,恢复早于LD,故诊断AMI价值不大。在急性肝炎时,AST虽亦显著升高,但升高程度不及ALT,而在慢性肝炎,特别是肝硬化时,AST升高程度超过ALT。胆道疾患时AST亦可升高。临床上血清ALT、AST表现为轻度增加(l~3U/L)的有膜腺炎、乙醇性脂肪肝、肝硬化、肉芽肿、肿瘤;中度增加(3~10U/L)的有传染性淋巴增多症、慢性活动性肝炎、肝外胆道梗塞、心肌梗死;重度增加(20U/L)的有病*性肝炎、中*性肝炎等。肝硬化、慢性活动性肝炎和心肌梗死常有ASTALT。
酶联-紫外连续监测法,本法正常参考值为8~35U/L,男性略高于女性,新生儿、婴儿可为成人的2~3倍。
比色法,本法正常参考值为8~28卡氏单位。
二、α-羟丁酸脱氢酶
α-羟基丁酸脱氢酶(α-HBDH)实际上不是一种独特的酶,而是H型LDH作用于另一底物的反映,故测定α-HBDH(主要代表LD1的活性)的活性对急性心肌梗塞的诊断比测定血清LD总活性的特异性高。用α-羟基丁酸作底物时,可测定H亚基的活性(主要为LDH1和LDH2之和),实际就是测定LDH1和LDH2活性之和,但因采用的底物不同,并不等于以乳酸为底物时LDH1和LDH2的活性。
一般认为,计算α-HBDH/LDH的比值可以帮助诊断肝病或心脏病,α-HBDH/LDH的比值健康人为0.67,急性心肌梗塞患者超过0.8,肝病患者在0.6以下,α-HBDH对确诊心肌梗塞是有价值的。此外,活动性风湿性心肌炎、急性病*性心肌炎、溶血性贫血,因LD1活性升高,α-HBDH活性也升高。
a-羟丁酸脱氢酶的实验室检测:双试剂速率法
健康成年人血清:72~u/L(速率法),各实验室测试条件有别,正常参考值常各自作出修订。
三、乳酸脱氢酶及同工酶
乳酸脱氢酶(LDH)是一种含锌的糖酵解酶,由两种亚单位组成:H(表示heart)和M(表示muscle)。它们按不同的形式排列组合形成含4个亚基的5种同工酶,即:LD1(H4)、LD2(H3M1)、LD3(H2M2)、LD4(HM3)、LD5(M4)。LDH活性增高主要见于心肌疾病、肝脏疾病。当肌营养不良、胰腺炎、肺梗死等LDH活性也增高。此外,脑脊液中LDH总活力升高出现在蛛网膜下腔出血及脑血管血栓形成并出血。脑或脑膜肿瘤不升高,而原发于其他部位转移入脑的可升高。
一般成年人血中LDH同工酶存在如下规律:LDH2LDH1LDH3LDH4LDH5。LDH1和LDH2在急性心肌梗死发作后8-12h出现在血中,48-72h达峰值,LDH的半寿期为57-l70h,大约7-12天回复正常,如果连续测定LDH,对于就诊较迟CK已恢复正常的AMI病人有一定参考价值。临床还常选用α-HBDH作为急性心肌梗死诊断指标。由于机体多处组织存在LDH,非梗死所致的快速心律失常、急性心包炎、心衰都可使LDH轻度升高,单纯用血清LDH活力升高诊断心肌损伤的特异性仅53%。
临床上测定LDH同工酶有助于相应组织病变的诊断。心肌梗死和心肌炎时以LDH1和LDH2高为主;骨骼肌和肝细胞损伤时常出现LDH5LDH4;急性肝炎时LDH1和LDH2相对下降,LDH5升高;慢性肝炎时LDH5升高,且LDH1LDH3;肝硬化时仅表现LDH2下降和LDH5升高;肝癌时LDH5升高,但LDH1LDH3。当心梗并发充血性,心力衰竭、心原性休克时,LDH5也可升高。肺、胰、脾、淋巴结坏死和炎症及各种恶性疾病时LDH2、LDH3、LDH4升高溶血性疾病、镰形细胞性贫血、地中海贫血、体外循环术后引起溶血、阵发性睡眠性血红蛋白尿时均有LDH1和LDH2升高,但仍为LDH2LDH1;恶性肿瘤如转移到肝脏往往伴有LDH4、LDH5高。
乳酸脱氢酶的测定方法有两种分别是:比色法,血清LDH的正常参考值为~U/dL。酶联-紫外连续监测法,顺向反应正常参考值为33~88U/L;逆向反应的正常参考值为~U/L。
乳酸脱氢酶同工酶的测定方法有:电泳法、免疫沉淀法和免疫抑制法等。其中电泳法分为醋酸纤维薄膜电泳、圆盘电泳、琼脂糖电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳。
血清乳酸脱氢酶正常范围是~U/L。
电泳法五种LDH同工酶参考值如下:
琼脂糖电泳法:
LDH1(28.4±5.3)%;
LDH2(41.0±5.0)%;
LDH3(19.0±4.0)%;
LDH4(6.6±3.5)%;
LDH5(4.6±3.0)%。
醋酸纤维素薄膜法:
LDH1(25.32±2.62)%
LDH2(34.36±1.57)%
LDH3(21.86±1.38)%
LDH4(11.3±1.84)%
LDH5(7.97±1.59)%
聚丙烯酰胺法:
LDH1(26.9±0.4)%
LDH2(36.0±0.5)%
LDH3(21.9±0.4)%
LDH4(11.1±0.4)%
LDH5(4.1±0.3)%
四、肌酸激酶及同工酶
肌酸激酶(CK)是心肌中重要的能量调节酶,CK是由M和B两类亚基组成的二聚体,形成CK-BB(CK1),CK-MB(CK2)和CK-MM(CK3)三种同工酶。在细胞线粒体内还存在另一CK同工酶,即所谓线粒体CK(CK-mt),也称CK4。CK同工酶是一种器官特异性酶。CK--BB存在于脑组织中,CK-MM和CK-MB存在各种肌肉组织中。
肌酸激酶的临床应用有:血清CK测定被认为是诊断AMI较好的血清酶,对AMI诊断具有以下特点:(1)早期诊断。(2)诊断效率高。(3)特异性强。(4)判断梗死部位、面积及预后CK总活力与心肌梗死的定位、面积及预后有关。(5)作为溶栓后再灌注的指标。急性病*性或风湿性心肌炎时,CK总活力轻、中度升高,可高达正常上限的5倍。治疗后随病情好转酶活性下降,至第6日降至正常。急性或慢性充血性心力衰竭、高血压性心脏病、心肌病等病人CK总活力正常,监测CK的变化,可鉴别是否已并发心肌梗死。
肌酸激酶同工酶的临床应用有:主要用于心肌、骨骼肌和脑疾患的诊断和鉴别诊断及预后判断。诊断AMI有关实验表明,在症状发生后12~48小时采样分析,CK-MB质量的临床灵敏度和临床特异性分别为96.8%和89.6%,这就使它成为对AMI临床诊断起重要作用的一个指标。同时,结合cTnT、MYO等心肌特异标志物可提高临床诊断的准确性。不稳定型心绞痛(UA)易发展为AMI或猝死,通过传统的酶学指标和心电图临床医生很难对UA患者进行前瞻性观察并采取相应的措施。这时临床医生可根据血清CK-MB定量检测结果来判断UA患者的预后情况,方便选择最佳的治疗方案。对于缺血性心肌损伤,特别是AMI,为了能了解疾病病情的进程,可利用CK-MB质量升高的程度对该疾病进行危险分层。确定心肌再灌注:在缺血性心脏疾病中,我们可通过CK-MB定量检测结果来判断溶栓治疗在短时间内再通与否,确定心肌再灌注以及观察治疗效果等。除此之外,CK-MB质量还可以用于较早期诊断AMI,也可以用于估计梗死范围大小或再梗死。CK-MM亚型测定对早期AMI的检出更为敏感,一般以CK-MM3/CK-MM11.0作为诊断AMI的标准,但必须排除急性骨骼肌损伤。CK-MB2亚型在AMI早期诊断和判断有无再灌注上有很高的灵敏度和特异性。一般CK-MB21.9U/L或CK-MB2/CK-MB11.5U/L可作为AMI的诊断标准之一。
CK的测定方法有比色法、紫外分光光度法和荧光法等。
检测CK-MB的方法:离子交换色谱和电泳法、免疫抑制法。
临床常规测定CK同工酶多用电泳和免疫抑制法,现在推荐用免疫化学方法直接测定CK-MBmass。近期又出现了检测CK-MB质量的化学发光法和时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)等。
用连续监测法(37℃)测定CK的参考范围为成年男性参考上限为U/L(37℃),女性为U/L,CK-MB的参考范围为0~24U/L。
临床上很少对CK-BB及CK-MM进行测定,正常血清中用电泳法查不到CK-BB,其占总CK活性的百分比约为CK-MM:>95%,CK-BB:<1%。如用免疫法测CK同工酶,依方法不同结果有异,可参考有关文献。
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